久游在线娱乐平台:土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法

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土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法
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土壤酶活性测定方法

土壤脲酶的测定方法(苯酚钠—次氯酸钠比色法)

一、原理

脲酶存在于大多数细菌、 真菌和高等植物里。 它是一种酰胺酶作用是极为专 性的,它仅能水解尿素,水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性 与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤 脲酶活性较高,中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征 土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也 可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质,根据酶促产物氨 与苯酚 -次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚,来分析脲酶活性。

二、试剂

1)甲苯

2) 10%尿素:称取 10g 尿素,用水溶至 100ml 。

3) PH6.7柠檬酸盐缓冲液:184g 柠檬酸和 147.5g 氢氧化钾(KOH )溶于蒸馏 水。 将两溶液合并, 用 1mol/LNaOH将 PH 调至 6.7, 用水稀释定容至 1000ml 。 4) 苯酚钠溶液 (1.35mol/L) :62.5g 苯酚溶于少量乙醇, 加 2ml 甲醇和 18.5ml 丙酮, 用乙醇稀释至 100ml (A 液) , 存于冰箱中; 27gNaOH 溶于 100ml 水 (B 液) 。将 A 、 B 溶液保存在冰箱中。使用前将 A 液、 B 液各 20ml 混合,用蒸 馏水稀释至 100ml 。

5)次氯酸钠溶液:用水稀释试剂,至活性氯的浓度为 0.9%,溶液稳定。

6)氮的标准溶液:精确称取 0.4717g 硫酸铵溶于水并稀释至 1000ml ,得到 1ml 含有 0.1mg 氮的标准液。 绘制标准曲线时, 再将此溶液稀释 10倍供用。 三、操作步骤

标准曲线制作:分别吸取稀释后的标准液 0、 1、 3、 5、 7、 9、 11、 13ml , 移于 50ml 容量瓶中,然后补加蒸馏水至 20ml 。再加入 4ml 苯酚钠溶液和 3ml 次氯酸钠溶液, 随加随摇匀。 20min 后显色, 定容。 1h 内在分光光度计上于 578nm 波长处比色。 然后以氮工作液浓度为横坐标, 吸光值为纵坐标, 绘制标准曲线。 称取 5g 土样于 50ml 三角瓶中,加 1ml 甲苯。 15min后加 10ml 10%尿素

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